哪些核心期刊容易发表之雷公藤多苷纳米载体的制备及药效学研究

发布时间：2015-02-05 14:54所属分类：临床医学论文浏览：1次加入收藏

哪些核心期刊容易发表 之好发表医学论文的期刊推荐 《临床皮肤科杂志》 是一份面向国内公开发行的临床皮肤学术性刊物。以保证质量，具有特色，重视临床、普及提高为办刊宗旨。实际上也是临床皮肤学专刊，是一本有关临床皮肤学基础研究、临床等方面的学术性期

　　哪些核心期刊容易发表之好发表医学论文的期刊推荐《临床皮肤科杂志》是一份面向国内公开发行的临床皮肤学术性刊物。以“保证质量，具有特色，重视临床、普及提高”为办刊宗旨。实际上也是临床皮肤学专刊，是一本有关临床皮肤学基础研究、临床等方面的学术性期刊。办刊的宗旨是：贯彻“百花齐放，百家争鸣”的方针，遵循理论与实际相结合，临床与基础相结合，普及与提高相结合的原则，为临床皮肤学的医疗、教学和科研提供学术交流的园地。
　　[摘要]该研究采用“纳米乳-凝胶技术”制备雷公藤多苷纳米凝胶，并对其药效学进行考察。以油酸作为油相，聚氧乙烯蓖麻油为表面活性剂，1，2-丙二醇为助表面活性剂，通过绘制伪三元相图确定雷公藤多苷纳米乳的处方组成，制备雷公藤多苷纳米凝胶。以7%的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液致敏，0.3%的2，4-二硝基氯苯溶液多次激发建立小鼠耳慢性皮炎湿疹模型，考察雷公藤多苷纳米凝胶对小鼠耳肿胀及皮肤红肿的影响;并采用ELISA法测定血清中IFN-γ，IL-4和IL-8等细胞因子的浓度，对雷公藤多苷纳米凝胶的药效学进行考察。结果表明，雷公藤多苷纳米凝胶可以显著抑制小鼠耳肿胀度(P<0.01)，并可以改善造模后小鼠耳部皮肤出现的水肿、红斑情况。雷公藤多苷纳米凝胶还可以显著降低模型小鼠血清中IFN-γ和IL-4的表达。该研究制备的雷公藤多苷纳米凝胶对小鼠皮炎湿疹模型具有良好的治疗效果，有望为临床皮炎湿疹的治疗提供一种新型外用长效制剂。

　　[关键词]雷公藤多苷,纳米凝胶,经皮给药,皮炎湿疹

　　Development of Tripterygium glycosides nano-carries based on

　　″nanoemulsion-gels″ and its pharmacodynamics

　　GU Qing1， YOU Ben-ming2， YANG Di-shun2， PAN Yong-hua2， SHU Wei1， LIU Ji-yong2*

　　(1.Department of Pharmacy， Central Hospital of Zhabei District， Shanghai 200070， China;

　　2.Department of Pharmacy， Changhai Hospital， Second Military Medical University， Shanghai 200433， China)

　　[Abstract]The aim of this study is to develop the Tripterygium glycosides nanoemulsion gels and investigate its pharmacodynamics. Oleic acid was used as oil phase， polyoxyethylene castor oil as surfaetant， and 1，2-propanediol as cosurfactant to screen the formula of Tripterygium glycoside nanoemulsion using the pseudo-temary phase diagrams.Then the nanoemulsion gels was prepared. The ICR mouse ears were sensitazated by 7% DNCB， and then were excited by 0.3% DNCB to stimulate the model of mouse chronic dermatitis and eczema.The concentrations of IFN-γ， IL-4 and IL-8 in mouse blood were determined by ELISA. The results showed that Tripterygium glycosides nanoemulsion gels could significantly inhibit the swelling of mouse ears(P<0.01)and ameliorate the edama and erythema of model mouse ears skin. Also it could significantly decrease the expression of IFN-γ and IL-4 in model mouse blood. Tripterygium glycosides nanoemulsion gels had a good therapeutic effect on mouse model of dermatitis and eczema. It was expected to provide a new and long-acting exterernal preparation for the treatment of dermatitis and eczema.

　　[Key words]Tripterygium glycosides; nanoemulsion gels; transdermal drug delivery; dermatitis eczema

　　doi：10.4268/cjcmm20150114

　　雷公藤多苷为卫茅科植物雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f的主要活性部位，包括雷公藤内酯甲、雷公藤内酯醇等萜类内酯化合物及少量的生物碱类成分，具有抗炎、镇痛、抗肿瘤等作用，常用于皮肤湿疹、类风湿性关节炎、免疫抑制、肾病综合症及恶性肿瘤等疾病的治疗，具有良好的效果。但由于雷公藤多苷口服存在着较大的毒性反应，其消化系统和泌尿生殖系统的不良反应发生率分别为35.8%，22.8%，严重限制了其临床应用[1]。 　　纳米乳凝胶(nanoemulsion-based gels，NBGs)是在纳米乳中加入卡波姆、泊洛沙姆等水溶性高分子材料，形成的透明、稳定的网状结构胶体[2-4]。以NBGs做为雷公藤多苷的微载体，既可利用纳米乳易于透过皮肤的特性，提高其透皮效率;同时凝胶具有缓慢释放的特性，又可达到长效作用的效果。且将雷公藤多苷制成经皮给药制剂，也可有效的避免口服给药肝脏的首过消除，降低其对胃肠道、肝肾功能的损害。本研究采用“纳米乳-凝胶技术”制备了雷公藤多苷纳米凝胶，并对其药效学进行了考察。

　　1材料

　　测厚仪(桂林广陆数字测控股份有限公司);磁力搅拌器(上海锦赋实验仪器设备厂);电子显微镜(AF6000，德国Leica公司);电子分析天平(XS205，瑞士梅特勒-托利多公司);MK2型酶标仪(芬兰 Labsystem公司); Multiskan 洗板机(芬兰Labsystem公司);Effendorf 5804R冷冻离心机(Effendorf 仪器有限公司)。

　　雷公藤多苷原料药(批号0910901，纯度>98%，浙江得恩德制药有限公司);雷公藤多苷片(含雷公藤多苷10 mg/片，上海复旦复华药业有限公司，批号130103);油酸(国药集团化学试剂有限公司);聚氧乙烯蓖麻油EL(阿拉丁试剂公司);1，2-丙二醇(上海制药有限公司);烷基葡萄糖苷(APG，中国日用化学工业研究院);2，4-二硝基氯苯(DNCB，分析纯，Sigma公司);4%多聚甲醛溶液(武汉谷歌生物科技有限公司);IFN-γ，IL-4，IL-8 ELISA试剂盒(Bender Medsystems GmbH);水为重蒸水;其他试剂为分析纯。

　　ICR小鼠，SPF级，雌性，体重22～26 g(上海斯莱克实验动物有限责任公司)，动物生产许可证号SCXK(沪)2007-0005。

　　2方法与结果

　　2.1雷公藤多苷纳米凝胶的制备

　　2.1.1伪三元相图的绘制[5]在前期处方筛选的基础上，选择油酸作为雷公藤多苷纳米乳的油相，聚氧乙烯蓖麻油为表面活性剂，1，2-丙二醇为助表面活性剂。分别将聚氧乙烯蓖麻油和1，2-丙二醇按1∶1，2∶1，3∶1，5∶1的质量比(Km)混匀后，再分别与油酸按9∶1，8∶2，7∶3，6∶4，5∶5，4∶6，3∶7，2∶8，1∶9的比例混匀，于室温下滴加水，观察系统由澄清变混浊及由混浊变澄清的临界点，用Origin 7.5软件绘制伪三元相图，结果见图1。O/W型纳米乳区域均较小，其中Km =2∶1体系的O/W型纳米乳区域稍大，因此选用该体系继续优化。

　　2.1.2雷公藤多苷纳米乳处方的优化考虑到伪三元相图中成乳区域较小，进一步采用乳化能力较强的新型乳化剂APG [C8～C10，非离子表面活性剂，亲水亲油平衡(HLB)值为12～14]来提高成乳区域。根据O/W 型纳米乳对乳化剂HLB的要求，可单用乳化剂APG，也可使用复合乳化剂。固定油相、水相及助表面活性剂不变，分别以APG及聚氧乙烯蓖麻油-APG(1∶1，1∶2，1∶3)复合乳化剂为表面活性剂，在不断搅拌下向体系中逐渐滴加水。以外观透明、均一，4 000 r・min-1离心5 min稳定不分层为评价标准，观察各体系的变化，结果见表1。

　　结果表明，以聚氧乙烯蓖麻油-APG(1∶1，1∶2，1∶3)复合乳化剂为表面活性剂时所得的纳米乳均为无色澄清液体，离心后采用聚氧乙烯蓖麻油-APG(1∶1)为表面活性剂的纳米乳出现分层现象;放置数小时后，采用聚氧乙烯蓖麻油-APG(1∶2)的体系依然稳定，而采用聚氧乙烯蓖麻油-APG(1∶3)的体系出现破乳现象，因此选用聚氧乙烯蓖麻油-APG(1∶2)复合乳化剂作为表面活性剂。

　　将聚氧乙烯蓖麻油-APG(1∶2)复合乳化剂和助表面活性剂1，2-丙二醇按Km 2∶1混匀后，再分别与油酸按9∶1，8∶2，7∶3，6∶4，5∶5，4∶6，3∶7，2∶8，1∶9的比例混匀，于室温滴加水，观察系统由澄清变混浊，由混浊变澄清的临界点，用Origin 7.5软件绘制伪三元相图，结果见图2。对比图2和图1可知，优化后的处方较之前成乳区域明显增大。

　　2.1.3雷公藤多苷纳米凝胶的制备根据伪三元相图，在相图的阴影区域选取3点，分别制备含雷公藤多苷0.6%，1.2%，1.8%的纳米乳。按处方比例将雷公藤多苷溶入油酸中，加入聚氧乙烯蓖麻油-APG(1∶2)和1，2-丙二醇，混合得到含药油相;在300 r・min-1恒速搅拌条件下，缓慢滴加蒸馏水至油相中至澄清透明，即得雷公藤多苷纳米乳。选择Carbopol 940作为凝胶基质，将2%的Carbopol 940加入甘油中研磨润湿，缓慢加入上述制备的纳米乳研磨均匀，密封后放置4 ℃冰箱过夜溶胀，即得透明的淡黄色雷公藤多苷纳米凝胶。

　　2.2雷公藤多苷纳米凝胶药效学研究

　　2.2.1小鼠慢性皮炎湿疹模型的建立根据文献[6-7]建立小鼠皮炎湿疹模型：ICR小鼠于实验第0天腹部脱毛约3 cm×4 cm，实验第1天脱毛部位均匀涂以7% DNCB丙酮溶液100 μL致敏，实验开始后第5，8，11，14天小鼠双侧耳朵各均匀涂0.3% DNCB丙酮溶液10 μL进行4次不间断激发。最后一次激发后24 h以测厚仪测量小鼠双侧耳朵的厚度，并对耳朵红肿情况进行评分(测耳厚及评分皆由同一实验人员完成)，以此作为炎症反应程度的指标。造模后小鼠耳部皮肤出现红肿、增厚等症状。最后一次激发后，空白对照组和模型组小鼠耳厚度分别为(0.225±0.010)，(0.332±0.036) mm(P<0.01)，表明模型建立成功，见图3。 　　2.2.2分组及给药取72只雄性ICR小鼠，随机分为6组，每组12只，分别为空白对照组，模型组，雷公藤多苷纳米凝胶低(15 mg・kg-1)、中(45 mg・kg-1)、高剂量组(90 mg・kg-1)和雷公藤多苷片组(10 mg・kg-1)。按2.2.1项下方法造模，小鼠于致敏后即开始给药。凝胶组分别给予不同剂量的雷公藤纳米凝胶腹部涂抹给药，每次0.5 g，每日1次;空白对照组和模型组分别给予等量的空白凝胶腹部涂抹给药;雷公藤多苷片组每日灌胃给药，每次0.2 mL，每日1次;上述各组均连续给药14 d。各组于每次激发前后各测量耳厚，并进行评分。最后一次激发后24 h测量耳厚，并处死小鼠，断头取血， 3 000 r・min-1离心后，取上层血清于-70 ℃冰箱中保存备用。小鼠双耳、胃和睾丸用4%多聚甲醛溶液进行固定，备用。

　　2.2.3耳厚测定及水肿红斑评分指定一名实验人员专项测量小鼠耳肿胀度及对耳水肿红斑情况评分。耳厚采用测厚仪测量，评分通过肉眼观察评定，评分标准参照文献[7]。结果表明：与模型组相比，雷公藤多苷纳米凝胶中、高剂量组均可以显著抑制小鼠耳肿胀度(P<0.01)，阳性对照药雷公藤多苷片也可以显著抑制小鼠耳肿胀度，其作用与雷公藤多苷纳米凝胶无显著差异，见表2。对小鼠耳部皮肤水肿、红斑的评分结果表明，雷公藤多苷纳米凝胶中、高剂量组和雷公藤多苷片均可以显著改善造模后小鼠耳部皮肤出现的水肿、红斑情况，而低剂量组与模型组相比无显著差异，见表3。

　　上述结果表明，雷公藤多苷纳米凝胶中、高剂量组均可以显著改善小鼠皮炎湿疹耳部炎症和水肿红斑症状。

　　2.2.4ELISA法测定血清中细胞因子的含量采用ELISA法测定各组动物血清中IFN-γ，IL-4，IL-8等细胞因子的浓度。结果表明，ICR小鼠造模成功后，模型组中IFN-γ和IL-4的浓度显著升高，中、高剂量的雷公藤多苷纳米凝胶可以显著降低模型小鼠血清中IFN-γ和IL-4的表达，IFN-γ的质量浓度分别从(257.17±8.48) μg・L-1降至(129.79±3.41) μg・L-1和(76.46±3.19) μg・L-1(P<0.01);IL-4的质量浓度分别从(45.54±1.77) μg・L-1降至(29.68±1.60) μg・L-1和(25.01±1.57) μg・L-1(P<0.01);均呈剂量相关性。雷公藤多苷片对

　　小鼠血清中IFN-γ和IL-4的表达也具有明显的抑制作用。但无论是模型组还是雷公藤多苷纳米凝胶组及雷公藤多苷片组，对小鼠血清中IL-8的表达均无显著影响，见图4。

　　2.2.5病理组织学检查小鼠耳、胃和睾丸组织标本经常规处理后制成5 μm厚石蜡切片，HE染色，光镜下观察各组织的病理变化情况。病理学检查发现，与空白对照组相比，模型组小鼠耳皮肤真皮层明显水肿增厚，血管扩张，真皮层可见大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润，可见有少量嗜酸性粒细胞浸润。给药处理后水肿可明显减轻，炎性细胞浸润也相应减少，见图5。表明雷公藤多苷纳米凝胶能够改善

　　小鼠皮肤湿疹模型耳部炎症病理改变。

　　通过比较胃黏膜的厚度可以发现，雷公藤多苷片灌胃给药组较空白组和雷公藤多苷纳米凝胶组的厚度变薄，表明雷公藤多苷纳米凝胶对胃肠道的损伤较雷公藤多苷片降低，见图6。

　　3讨论

　　雷公藤多苷中雷公藤内酯甲、雷公藤内酯醇等成分既是其活性成分，又是毒性成分，其水溶性差，难以透过皮肤。将雷公藤多苷制成纳米乳后，既提高了雷公藤多苷的溶解度，又可以利用纳米乳易于透过皮肤的特性，提高其透皮效率;进一步制成纳米

　　公藤多苷纳米乳为O/W型纳米乳，粒径在30 nm左右，外观圆整均匀，性质稳定[8]。进一步以Carbopol 940为凝胶基质，采用研磨分散法制备得到雷公藤多苷纳米凝胶，NBGs可以提高纳米乳的黏度，改善纳米乳与皮肤的黏附性和涂展性，并且由于体系黏度的增大，药物在NBGs中的扩散受阻，有效扩散系数减小，因此可以使药物维持更长的作用时间。雷公藤多苷纳米凝胶为雷公藤制剂的临床应用提供了一种新型外用纳米载体。

　　皮肤慢性皮炎湿疹模型的建立有多种方法[9-11]。本研究采用ICR小鼠为实验动物，以7%的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液致敏，再多次使用低浓度的2，4-二硝基氯苯激发小鼠的耳朵而成功建立。本研究考察了雷公藤多苷纳米凝胶对模型小鼠耳厚度、红肿程度、血清炎症细胞因子及耳部皮肤病理形态的影响，结果表明，雷公藤多苷纳米凝胶能减轻模型小鼠耳部肿胀度和抑制耳部皮肤水肿、红斑的形成。对耳部皮肤的病理学检查显示，雷公藤多苷纳米凝胶能够减轻模型小鼠耳部皮肤的水肿、炎性细胞浸润、血管扩张等炎性改变，表明雷公藤多苷纳米凝胶外用给药具有良好的抗皮炎湿疹作用。通过测定血清中IFN-γ，IL-4和IL-8等细胞因子的表达，发现雷公藤多苷纳米凝胶能够抑制模型小鼠IFN-γ和IL-4的分泌。IFN-γ和IL-4分别由Th1和Th2细胞分泌，是炎症过程中重要的免疫调节因子，雷公藤多苷纳米凝胶可能通过抑IFN-γ和IL-4的分泌，影响皮肤Th1/Th2细胞对皮肤炎症因子调节的级联反应，从而发挥抗炎作用。同时本研究发现趋化因子IL-8在模型小鼠血清中的表达未见显著变化。 　　雷公藤多苷口服给药存在着较大的毒性反应，以消化系统和泌尿系统不良反应较为常见。本研究通过比较不同给药组小鼠胃黏膜的厚度可以发现，雷公藤多苷片灌胃给药组较空白组和雷公藤多苷纳米凝胶组的厚度变薄，表明雷公藤多苷纳米凝胶对胃肠道的损伤较雷公藤多苷片降低，其外用减毒机制尚需进一步研究。

　　[参考文献]

　　[1]孔蓓俊，刘继勇，高申，等.雷公藤现代应用及不良反应研究进展[J].上海中医药杂志，2011，45(6)：87.

　　[2]Gregor Cevc， Ulrich Vierl. Nanotechnology and the transdermal route： a state of the art review and critical appraisal [J]. J Control Release， 2010， 141：277.

　　[3]Ming Kong， Hyun Jin Park. Stability investigation of hyaluronic acid based nanoemulsion and its potential as transdermal carrier [J].Carbohyd Polym， 2011， 83：1303.

　　[4]Victoria Klang， Nadejda Matsko， Anna-Maria Zimmermann， et al.Enhancement of stability and skin permeation by sucrose stearate and cyclodextrins in progesterone nanoemulsions [J]. Int J Pharm， 2010， 393：1531.

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